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NEST細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)步驟你知道嗎
點(diǎn)擊次數(shù)：1999 更新時(shí)間：2019-09-26
NEST細(xì)胞培養(yǎng)在藥理學(xué)中的應(yīng)用比較廣泛。通過NEST細(xì)胞培養(yǎng)的生長(zhǎng)曲線可計(jì)數(shù)細(xì)胞增長(zhǎng)的指數(shù)，從而可以直觀地了解細(xì)胞生長(zhǎng)與死亡的動(dòng)態(tài)變化，一般用于檢測(cè)各種藥物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。利用培養(yǎng)細(xì)胞的放射自顯技術(shù)，研究細(xì)胞的物質(zhì)代謝、動(dòng)態(tài)變化和細(xì)胞周期等，對(duì)于藥物作用機(jī)制的研究有重要作用。細(xì)胞培養(yǎng)可用于抗動(dòng)脈粥樣硬化、血糖等藥物的研究等應(yīng)用。
在NEST細(xì)胞培養(yǎng)過程中，經(jīng)常加入5%-20%的胎牛血清，常使用的BI胎牛血清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細(xì)胞的基因表達(dá)譜，影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中使用10%的BI澳洲胎牛血清培養(yǎng)NEST細(xì)胞，效果非常好。但是有些細(xì)胞也會(huì)使用5%的BIFBS或者20%的BI胎牛血清，要根據(jù)具體細(xì)胞選擇合適的BI胎牛血清濃度。
首先，倒掉舊的培養(yǎng)基，加入3ml新的培養(yǎng)基（有無血清的都可）洗滌一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培養(yǎng)基，進(jìn)行預(yù)吹打，控制吹打力度，輕輕地大概沿著瓶底過一遍，然后吸走。這時(shí)侯再開始正式的消化、吹打。（巨噬細(xì)胞我們只吹打，不消化的）
其次，把吹打下來的細(xì)胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，按時(shí)間點(diǎn)觀察細(xì)胞貼壁情況。10分鐘觀察一次，20分鐘，30分鐘觀察一次。選擇一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，已經(jīng)有部分細(xì)胞貼壁的情況下，重新置于潔凈臺(tái)，底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基，加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入*培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況以及形態(tài)。
如果一次效果還不理想，可重復(fù)多次。直到找到細(xì)胞形態(tài)。其中要注意，結(jié)合細(xì)胞喜歡的生長(zhǎng)情況。喜歡多一點(diǎn)數(shù)量長(zhǎng)得好的細(xì)胞你就等貼壁細(xì)胞比較多點(diǎn)的時(shí)候再傳。反之亦然。老化的會(huì)比較多，對(duì)后期實(shí)驗(yàn)結(jié)果是不好的。所以在NEST細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候應(yīng)該摸索該細(xì)胞喜歡的生長(zhǎng)空間密度問題.
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